培養(yǎng)基是將微生物生長(zhǎng)繁殖所需要的各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),用人工方法配制而成的各種營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。培養(yǎng)基為微生物的生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和生存空間。
滅菌的方法,通??梢苑譃樗拇箢悾?/strong>
1、加熱滅菌:包括直接灼燒滅菌、干熱滅菌、加壓蒸汽滅菌、間歇滅菌和煮沸消毒;
2、過(guò)濾去菌;
3、射線滅菌和消毒;
4、化學(xué)藥劑滅菌和消毒。
在本實(shí)驗(yàn)中,介紹與培養(yǎng)基和玻璃器材滅菌有關(guān)的部份滅菌方法。
1. 干熱滅菌法(即熱空氣滅菌法)
干熱滅菌一般是利用電熱烘箱作為干熱滅菌器。前面所包裝好的玻璃器皿,如帶棉塞的三角瓶,試管、包裝好的吸管、培養(yǎng)皿等,放入電熱烘箱中。
打開(kāi)烘箱頂部的通氣孔,接上電源加熱,使箱內(nèi)空氣的溫度達(dá)到160℃~170℃,關(guān)閉通氣孔使箱內(nèi)的溫度保持在160℃左右并維持1.5-2h。時(shí)間一到,切斷電源。待溫度下降60℃~70℃以下,方可打開(kāi)箱門(mén)取滅菌物品,否則驟冷后易使箱內(nèi)玻璃儀器破損。
2. 加壓蒸氣滅菌法
利用高壓滅菌器,使水的沸點(diǎn)在密閉的滅菌器內(nèi)隨壓力升高而增高(見(jiàn)表6-2),來(lái)提高蒸汽的溫度和滅菌的效率。
在同一溫度下濕熱的殺菌效率比干熱大,因?yàn)槲⑸锛?xì)胞蛋白質(zhì)在濕熱情況下,易干凝固(見(jiàn)表6-3)。同時(shí)濕熱的穿透力強(qiáng),當(dāng)水蒸汽與被滅菌的物品相接觸后,便放出汽化潛熱,逐步提高被滅菌物品的溫度,直至與水蒸汽的溫度相等,達(dá)到平衡為止,從而提高滅菌效率。
手提式高壓滅菌鍋滅菌的操作步驟如下:
(1)、在滅菌器內(nèi)加入一定量的水(有的滅菌器內(nèi)加水至止水線)。將用防水紙包扎好的滅菌物品如培養(yǎng)基、無(wú)菌水等,放進(jìn)滅菌器內(nèi)。
(2)、接通電源,進(jìn)行加熱。
(3)、當(dāng)壓力到達(dá)5bl/in2時(shí),打開(kāi)放氣閥,使鍋內(nèi)的空氣和水蒸汽一同排出,直至壓力表的壓力恢復(fù)到零,然后關(guān)閉排氣閥,繼續(xù)加熱。
(4)、當(dāng)壓力表*的壓力到達(dá)15bl/in2(即 1.05kg/cm2)時(shí),此時(shí)滅菌器內(nèi)的溫度達(dá)到121℃,維持30min不變。對(duì)熱不穩(wěn)定的培養(yǎng)基滅菌時(shí),應(yīng)適當(dāng)降低壓力,延長(zhǎng)時(shí)間。
(5)、滅菌時(shí)間一到,切斷電源,待壓力下降至零時(shí),才能打開(kāi)排氣孔,然后打開(kāi)滅菌器蓋,取出物品。如果滅菌后的固體培養(yǎng)基要做成斜面,需趁熱放置。還需檢查培養(yǎng)基滅菌是否徹di。
3. 間歇滅菌法
常采用阿諾(Arnold)氏滅菌器和柯赫(Koch)氏滅菌器或蒸籠滅菌,常壓條件下蒸汽溫度不超過(guò)100℃。在沒(méi)有高壓滅菌器設(shè)備的情況下或不宜加壓滅菌的物品,可采用此法滅菌。
方法是:待滅菌物品放在滅菌器或蒸籠里,每d蒸煮1次,每次煮沸l(wèi)h,連續(xù)3d重復(fù)進(jìn)行。在每?jī)纱握糁笾g,將物品(指培養(yǎng)基)放在37C恒溫條件下培養(yǎng)過(guò)夜,這樣可以使每次蒸煮后未殺死的殘留芽孢萌發(fā)成營(yíng)養(yǎng)體,以便下1次蒸煮時(shí)殺滅。
4. 過(guò)濾除菌法
一些不能加熱滅菌的液體物質(zhì)(如維生素、血清),可以用過(guò)濾除菌法,一般用細(xì)菌過(guò)濾器進(jìn)行除菌。(教師示范)
細(xì)菌過(guò)濾器中的過(guò)濾板常用陶瓷、硅藻土或石棉等做成,過(guò)濾板孔眼很小,細(xì)菌不能通過(guò)。因此,過(guò)濾后的液體就除去了細(xì)菌。在進(jìn)行過(guò)濾除菌前,整個(gè)細(xì)菌過(guò)濾器和接受液體的器皿,必須要包裝妥當(dāng)并進(jìn)行加壓蒸汽滅菌后方可使用。
下面介紹石棉板濾器的構(gòu)造及其操作方法。石棉板濾器又稱蔡氏(Scitz)濾器,它是由石棉制成的圓形濾板和一個(gè)特制漏斗組成。此漏斗分上下兩節(jié)。上節(jié)為圓形金屬筒,下節(jié)為金屬漏斗。兩節(jié)由三個(gè)活動(dòng)螺旋固定,便于裝卸。使用時(shí)拆開(kāi)兩節(jié),將濾板放在漏斗上的金屬篩板,再加上上節(jié),然后將螺旋扭緊,將欲濾溶液置于濾器中抽濾。每次過(guò)濾必須用一張無(wú)菌的新濾板。石棉板濾器因容積大小不同而有各種型號(hào),石棉板也有不同規(guī)格型號(hào)使用時(shí)必須根據(jù)需要搭配妥當(dāng)。
5. 紫外線滅菌
波長(zhǎng)260~280nm之間的紫外線有很強(qiáng)的殺菌能力,一般紫外燈管能產(chǎn)生253.7nm的紫外光,殺死力強(qiáng)而穩(wěn)定,但穿透力弱一般只適宜物體表面、空氣滅菌。例如接種室、培養(yǎng)室、手術(shù)室、藥廠包裝室等空氣滅菌。一般30w燈管、9m3空間,距地面2m每次打開(kāi)紫外線照射0.5h,就使室內(nèi)空氣滅菌。若照射紫外線時(shí),先噴灑石碳酸等化學(xué)消毒劑,可增強(qiáng)滅菌效果。
在進(jìn)行微生物接種和分離等操作時(shí),常須用紫外線來(lái)殺滅接種室(箱)空氣、臺(tái)面等處的微生物。
紫外線雖有較強(qiáng)的殺菌力,但穿透力較弱,即使一薄層玻璃或水層就能將大部分紫外線濾除,因此只適用于空氣及表面殺菌。
紫外線對(duì)眼粘膜及視神經(jīng)有強(qiáng)烈的損傷作用,對(duì)皮膚有刺激作用,所以不能直接在紫外線燈開(kāi)啟下工作和用眼睛直視開(kāi)啟的紫外燈。
6. 化學(xué)藥劑消毒滅菌
微生物實(shí)驗(yàn)室中常用的化學(xué)殺菌劑有升、甲醛、酒精、碘酒、龍膽紫、石炭酸、漂白粉、新潔爾滅、煤酚皂溶液,它們有的是殺菌劑,有的是抑菌劑。