更新時(shí)間:2023-10-26
K599 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50菌株一種常用于質(zhì)粒克隆的菌株。其φ80lacZΔM15基因的產(chǎn)物可與pUC載體編碼的b-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)a互補(bǔ),可用于藍(lán)白斑篩選。recA1和endA1 的突變有利于克隆DNA 的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。
K599 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50以下是的訂購信息儲存條件:-70℃凍存
操作方法:
1. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)于室溫或手心片刻待其部分融化,處于冰水混合狀態(tài)時(shí)插入冰中。
2.每100 μl感受態(tài)加入0.01-1 μg質(zhì)粒DNA(轉(zhuǎn)化效率較高,*次使用前做預(yù)實(shí)驗(yàn)確定所加質(zhì)粒的量),用手管底混勻,依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。
3. 加入700 μl無抗生素的LB或YEB液體培養(yǎng)基,于28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時(shí)。
K599 感受態(tài)細(xì)胞100ul*504. 6000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天
注意事項(xiàng)
1. 加入質(zhì)粒時(shí)體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10;質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機(jī)物污染,轉(zhuǎn)化效率急劇下降;質(zhì)粒增大一倍,轉(zhuǎn)化效率下降一個(gè)數(shù)量級。
2. 混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)??上鄳?yīng)減少終用于涂板的菌量。
K599 感受態(tài)細(xì)胞100ul*503. 平板上陽性克隆密度過大時(shí),由于營養(yǎng)不足,陽性克隆生長變慢,菌落變小,為了獲得大的菌落,應(yīng)減少質(zhì)粒用量。
4. 濃度不應(yīng)高于25 μg/ml,過高的濃度不利于農(nóng)桿菌生長,會降低其生長速度和轉(zhuǎn)化效率。本公司感受態(tài)計(jì)算轉(zhuǎn)化效率時(shí)所用平板只含有50 μg/ml kan,若所用平板含有20 μg/ml rif則轉(zhuǎn)化效率降低到1/2。
5. 培養(yǎng)基中加入的目的是防止雜菌生長、篩選農(nóng)桿菌;根據(jù)所用菌株抗性加入Ti質(zhì)粒篩選抗生素可防止Ti質(zhì)粒丟失,但Ti質(zhì)粒篩選抗生素不利于農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)基因操作,所以一般培養(yǎng)農(nóng)桿菌時(shí)不考慮這些抗生素,Ti質(zhì)粒丟失的概率極低(可以忽略)。
Amylin 大鼠胰淀素 規(guī)格: 48T/96T
ICA 大鼠胰島細(xì)胞抗體 規(guī)格: 48T/96T
IAA 大鼠胰島素自身抗體 規(guī)格: 48T/96T
PI 大鼠胰島素原 規(guī)格: 48T/96T
IGFBP-4 大鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白4 規(guī)格: 48T/96T
IGFBP-3 大鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3 規(guī)格: 48T/96T
IGFBP-2 大鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白2 規(guī)格: 48T/96T
IGFBP-1 大鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白1 規(guī)格: 48T/96T
IGF-2 大鼠胰島素樣生長因子2 規(guī)格: 48T/96T
IGF-1 大鼠胰島素樣生長因子1 規(guī)格: 48T/96T
ISR-β 大鼠胰島素受體β 規(guī)格: 48T/96T
INS 大鼠胰島素 規(guī)格: 48T/96T
TAP 大鼠原激活肽 規(guī)格: 48T/96T
trypsin 大鼠 規(guī)格: 48T/96T
NOS 大鼠一氧化氮合成酶 規(guī)格: 48T/96T
FA 大鼠 規(guī)格: 48T/96T
OLAb 大鼠氧化低密度脂蛋白抗體 規(guī)格: 48T/96T
OxLDL 大鼠氧化低密度脂蛋白 規(guī)格: 48T/96T
NADPH 大鼠腺嘌呤二核苷酸磷酸 規(guī)格: 48T/96T
N-AChR 大鼠煙堿型乙酰受體 規(guī)格: 48T/96T
PF-4/CXCL4 大鼠血小板因子4 規(guī)格: 48T/96T
PF-3 大鼠血小板因子3 規(guī)格: 48T/96T
PDGFsR-α 大鼠血小板衍生生長因子可溶性受體α 規(guī)格: 48T/96T
PDGF-BB 大鼠血小板衍生生長因子BB 規(guī)格: 48T/96T
PDGF-AB 大鼠血小板衍生生長因子AB 規(guī)格: 48T/96T
PDGF 大鼠血小板衍生生長因子 規(guī)格: 48T/96T
TPO 大鼠血小板生成素 規(guī)格: 48T/96T
GP-ⅡbⅢa 大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa 規(guī)格: 48T/96T
PAF 大鼠血小板活化因子 規(guī)格: 48T/96T
TSP-1 大鼠血小板反應(yīng)蛋白/敏感蛋白1 規(guī)格: 48T/96T
FDP 大鼠血纖蛋白原降解產(chǎn)物 規(guī)格: 48T/96T
Fbg 大鼠血纖蛋白原 規(guī)格: 48T/96T
TXB2 大鼠血栓素B2 規(guī)格: 48T/96T
TpP 大鼠血栓前體蛋白 規(guī)格: 48T/96T
TM 大鼠血栓調(diào)節(jié)蛋白 規(guī)格: 48T/96T
K599 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50CH50 大鼠血清總補(bǔ)體 規(guī)格: 48T/96T
NO 大鼠血清一氧化氮 規(guī)格: 48T/96T
48T/96T