公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

二、細(xì)胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)為主。將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

    a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。        

    b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細(xì)胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。        

     c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

     b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。  

三、培養(yǎng)注意事項(xiàng) 

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。

3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。     收到細(xì)胞后次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè) T25 瓶或者 2 個(gè) 6cm 皿。不是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè)10cm 皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

phospho-MLC(Ser20)： 0酸化肌球蛋白輕鏈抗體 MGC80-3細(xì)胞，胃癌細(xì)胞 人喉癌細(xì)胞,TU212細(xì)胞 正常大鼠腎細(xì)胞;NRK

KDR Others Mouse 小鼠 VEGFR2 / Flk-1 / CD309 / KDR 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 大鼠細(xì)胞色素P450 3A4(CYP3A4)ELISA試劑盒 IL-1 Beta(Human Interleukin 1 Beta)  人白介素1β (IL-1B) 96T

MuRF1/Trim63： 肌肉細(xì)胞特異性泛素蛋白連接酶1抗體 人角膜上皮細(xì)胞cDNAHCEpiC cDNA

CAL 27人舌鱗癌細(xì)胞 Human tongue squamous cell carcinoma cell line CAL 27 DMEM+10% FBS 大鼠細(xì)胞色素P450 1A1(CYP1A1)ELISA試劑盒 T 睪酮 96T

MAFbx/Fbx32： 泛素蛋白連接酶抗體 RSPO1 Others Human 人 R-Spondin 1 / RSPO1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

CXCL16 Protein Canine 重組狗 CXCL16 / SR-PSOX 蛋白 (His 標(biāo)簽) 人乙酰化酶(CHAc)ELISA 試劑盒 HLA-DR(human leukoyte Antigen DR) HLA-DR抗原 0.5mg

HOMER2： HOMER2抗體 ENPP3 Others Cynomolgus 食蟹猴 ENPP3 / CD203c 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人胰島β細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 人酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)ELISA 試劑盒 HLA-E 人類(lèi)白細(xì)胞抗原E 0.5mg

HDBP2： 瘤病毒調(diào)控因子1抗體 水牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;WB-S5 腎透明細(xì)胞腺癌，786-0細(xì)胞 A-375 [A375](惡性黑色素瘤細(xì)胞)

REG3A Others Rat 大鼠 REG3A 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (CH)ELISA試劑盒 Anti-HMGA1 (high mobility group AT-hook 1) 高遷移率族蛋白A1抗原 0.5mg

Ishikawa人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞PSGR： 前列腺特異性G蛋白偶聯(lián)受體/嗅覺(jué)受體51E2抗體 CD58 Others Cynomolgus 食蟹猴 LFA-3 / CD58 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

NCI-H345(懸浮) 小細(xì)胞肺癌 大鼠低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白5(LRP5)ELISA試劑盒 FS(Human Follistatin)  人卵泡抑素 96T

P2Y11： G蛋白偶聯(lián)嘌呤受體p2y11抗體 THP1細(xì)胞，人單核細(xì)胞型淋巴瘤 人導(dǎo)管瘤細(xì)胞,BT-474細(xì)胞 非必需氨基酸　100XNEAA

CD83 Others Mouse 小鼠 CD83 / HB15 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 大鼠低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1(LRP-1)ELISA試劑盒 TAb(Human Parathyroid Hormone Related Protein)  人甲狀腺素抗體 猴源細(xì)胞

NCI-N87 [N87]人胃癌細(xì)胞 大鼠低密度脂蛋白受體(LDLR)ELISA試劑盒 CA(Human catecholamine)  人兒茶酚胺 96T